WB實(shí)驗(yàn)中的磷酸酶抑制劑

一、WB實(shí)驗(yàn)中的磷酸酶抑制劑的作用

細(xì)胞或組織裂解時(shí)會(huì)釋放出大量?jī)?nèi)源性蛋白磷酸酶，以各種方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化，從而影響后續(xù)的蛋白檢測(cè)。因此在提取物中適量添加外源性磷酸酶抑制劑，有利于在之后的Western blotting、免疫共沉淀檢測(cè)磷酸化蛋白質(zhì)和蛋白激酶活性測(cè)定等實(shí)驗(yàn)過(guò)程中抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，維持蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài)。

二、WB實(shí)驗(yàn)中的磷酸酶抑制劑的作用原理

在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中，靶蛋白會(huì)被可將磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到特定位點(diǎn)的蛋白激酶磷酸化。這些磷酸基團(tuán)在細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)被內(nèi)源性蛋白磷酸酶去除。磷酸酶抑制劑有助于在細(xì)胞裂解和蛋白質(zhì)提取過(guò)程中保持磷酸蛋白的活性和狀態(tài)。

三、常用的磷酸酶抑制劑的分類(lèi)

常見(jiàn)的磷酸酶有蛋白酪氨酸磷酸酶、堿性磷酸酶和酸性磷酸酶，常用的磷酸酶抑制劑如下：

1. 氟化鈉（sodiμm fluoride）：酸性磷酸酶可逆抑制劑；

2. 焦磷酸鈉（sodiμm pyrophosphate）：絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶不可逆抑制劑；

3. β-甘油磷酸（β-glycerophosphate）：絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶可逆抑制劑；

4. 正釩酸鈉（sodiμm orthovanadate）：堿性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶可逆抑制劑：

5. 鉬酸鈉（sodiμm molybdate）：酸性磷酸酶不可逆抑制劑；

6. 二水酒石酸鈉（sodiμm tartrate dihydrate）：酸性磷酸酶可逆抑制劑；

7. 咪唑（imidazole）：堿性磷酸酶可逆抑制劑。

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