Elabscience一步法TUNEL流式凋亡檢測(cè)試劑盒怎么用？

Elabscience® One-step TUNEL Flow Cytometry Apoptosis Kit 是一款靈敏度高且能快速簡(jiǎn)便地檢測(cè)細(xì)胞凋亡的產(chǎn)品。該試劑盒可通過(guò)流式細(xì)胞儀來(lái)進(jìn)行懸浮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞的流式凋亡檢測(cè)。那么你知道Elabscience一步法TUNEL流式凋亡檢測(cè)試劑盒怎么用嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、實(shí)驗(yàn)步驟

1. 收集細(xì)胞并進(jìn)行計(jì)數(shù)，每組取1×10⁶個(gè)細(xì)胞，300×g 離心5 min，棄上清。

注：若樣本為貼壁細(xì)胞，凋亡細(xì)胞會(huì)有部分懸浮于上清中，上清中的細(xì)胞也要收集。

2. 加入200 μL PBS（含 1%BSA）重懸細(xì)胞，加入200 μL Fixation Buffer，室溫固定60 min（推薦使用搖轉(zhuǎn)方式，或每 15 min 混勻一次）。

3. 加入1mL PBS（含 1%BSA），600×g 離心 5 min，棄上清。

4. 加入200 μL Permeabilization Buffer，冰上破膜 10 min。

注：破膜溫度過(guò)高或者時(shí)間過(guò)久會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞破碎，因此建議Permeabilization Buffer 解凍后放置在 4°C，待使用前取出；另外破膜時(shí)間最長(zhǎng)不要超過(guò)15 min。

5. 加入1~2 mL PBS（含 1%BSA）終止破膜，輕輕吹打混勻后，600×g離心 5 min，棄上清。

6. 加入200 μL TdT Equilibration Buffer，輕輕吹打混勻，37°C平衡15 min。

7. 600×g離心5 min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀。

8. 按照分組參考下表配制標(biāo)記工作液，每個(gè)樣本加入100μL反應(yīng)液（充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用）。

注：

① TdT Equilibration Buffer 使用前，室溫靜置直至wan全溶解。冰凍的平衡液融化后可能會(huì)出現(xiàn)鈷鹽結(jié)晶，此為正?，F(xiàn)象。使用前渦旋混勻。

② Labeling Solution 使用前，請(qǐng)置于冰上溶解，待wan全溶解后離心，用槍頭吹打混勻。

③ TdT Enzyme 對(duì)溫度較敏感，請(qǐng)嚴(yán)格保存于-20°C，使用前取出，使用后立即放回。

④ 配制標(biāo)記工作液時(shí)，建議不要渦旋。

9. 37°C 避光孵育60 min（每 20 min 輕輕搖晃混勻細(xì)胞）。

10. 加入1mL Stop Solution輕輕吹打混勻，室溫靜置5 min，加入 300~500 μL PBS(含 1%BSA)，600×g離心 5 min，棄上清。

11. 加入 200 μL PBS（含 1%BSA）重懸細(xì)胞，上機(jī)檢測(cè)。

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