你知道RNA提取的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎？

RNA是目前發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)生物功能zui豐富多樣的生物大分子，同時(shí)是DNA與蛋白質(zhì)信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時(shí)代的重要手段，那么你知道RNA提取的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

以Trizol法提取組織細(xì)胞為例：

1.提取細(xì)胞RNA時(shí)，先離心沉淀細(xì)胞，每5~106個(gè)細(xì)胞加1ml Trizol后，反復(fù)用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細(xì)胞；

2.將上述組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中，在室溫15~30℃下放置5分鐘；

3.在上述EP管中，按照每1ml Trizol后加0.2ml氯仿的量加入氯仿，蓋上EP管蓋子，在手中用力震蕩15秒，在室溫下（15~30℃）放置2~3分鐘后，12000g（2~8℃）離心15分鐘；

4.去上層水相置于新EP管中，按照每1ml Trizol加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15~30℃）放置10分鐘后，12000g（2~8℃）離心10分鐘；

5.棄上清，按照每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇進(jìn)行洗滌，渦旋混合，7500g（2~8℃）離心5分鐘，棄上清；

6.讓沉淀的RNA在室溫在自然干燥；

7.用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。

8.RNA檢測(cè)

(1) RNA的電泳圖譜，電泳的目的是在于檢測(cè)28S、18S、5S條帶的完整性和他們的比值，一般的，如果28S和18S條帶明亮、清晰、條帶銳利，并且28S的亮度在18S條帶的兩倍以上，我們認(rèn)為RNA的質(zhì)量是好的。

(2) 測(cè)定樣品在260nm和280nm的吸光值按1OD=40μg/ml RNA計(jì)算RNA的產(chǎn)量，一般的OD260/OD280在1.8-2.0范圍，我們認(rèn)為RNA的質(zhì)量是好的，如果R<1.8，說(shuō)明溶液中蛋白或者時(shí)其他有機(jī)物的污染比較明顯，如果R>2.2，說(shuō)明RNA已經(jīng)水解成單核酸了。

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